ND試劑用于試驗(yàn)檢測(cè)，下面，我們來(lái)介紹下ND試劑檢驗(yàn)原理：
    本試劑盒基于實(shí)時(shí)熒光PCR平臺(tái)，結(jié)合等位基因特異性擴(kuò)增（ARMS）技術(shù)、野生型基因擴(kuò)增抑制技術(shù)和多重PCR技術(shù)檢測(cè)EGFR基因19、21外顯子的14種突變。
    ARMS技術(shù)是指PCR引物的3’端末位堿基必須與其模板DNA互補(bǔ)才能有效擴(kuò)增，通過設(shè)計(jì)特異性ARMS引物組（共6條ARMS上游引物，包括5條檢測(cè)19外顯子突變和1條檢測(cè)21外顯子突變的引物）和2條下游引物，對(duì)存在突變的EGFR基因19、21外顯子的靶序列進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，并利用分別標(biāo)記有HEX熒光基團(tuán)——BHQ1淬滅基團(tuán)和FAM熒光基團(tuán)——BHQ1淬滅基團(tuán)的兩條Taqman 探針分別實(shí)現(xiàn)對(duì)19，21突變外顯子擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。
    因?yàn)槿祟怑GFR基因突變檢測(cè)試劑盒采用了野生型基因擴(kuò)增抑制劑，使ARMS體系能夠耐受更高濃度的背景野生型EGFR基因，降低了試劑盒對(duì)基因組樣本的DNA濃度要求，提高了檢測(cè)靈敏度。 
為質(zhì)控?cái)U(kuò)增體系的有效性，試劑盒設(shè)置了內(nèi)質(zhì)控和外質(zhì)控，內(nèi)質(zhì)控基因是人類基因組的一個(gè)保守片段，長(zhǎng)度與EGFR目標(biāo)片段相似，均為100bp左右，內(nèi)控探針采用標(biāo)記ROX熒光基團(tuán)——BHQ2淬滅基團(tuán)的Taqman探針對(duì)內(nèi)控基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。
    內(nèi)控引物、探針及內(nèi)控基因?qū)RMS體系的擴(kuò)增效率無(wú)影響。陽(yáng)性對(duì)照品是一種擴(kuò)增效率低的EGFR基因19外顯子L747_P753>S突變質(zhì)粒與野生型人類基因組DNA的混合物，用于PCR擴(kuò)增的外質(zhì)控。