GIBCO 10091-148（新西蘭）胎牛血清出現顏色或沉淀的問題

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GIBCO 10091-148（新西蘭）胎牛血清出現顏色或沉淀的問題

1、問：我用的是四季青的胎牛血清，56℃30分鐘滅活后出現了白色少量絮狀沉淀，是不是污染？還能不能 再用？血清的生產日期是2006年7月(現在是2007年6月11日)。

答：應該問題不大。你可以取少量血清放入培養皿中，37℃過夜培養看看就知道是否污染了。血清中沉淀 物的出現有許多種原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在 血渭解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。 若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起 過濾。

2、問：我用MTT法測細胞的增殖，用DMSO裂解細胞，發現把DMSO加入到孔中就會形成乳白色(用的含胎牛血 清的1640培養基，由于沒有離板子的離心機，所以沒有去除培養基直接加的DMSO)。以前用含小牛血清的培養基沒有 看到有這種情況。該怎么解決？

答：為什么要用離心機離心呢？難倒你養的是懸浮細胞嗎？如果是貼壁細胞的話直接將MTT倒掉，再加DMSO 即可，我們就是這么做的，效果很好！并且測細胞的增殖的話如果不去掉MTT就加DMSO的話誤差應該很大！有時不一 定就是血清的原因，可能跟你的MTT放置的時間或以及其他成分有關！

3、問：(1)GIBCO胎牛血清500ml，今天解凍后沒有混勻直接分裝，結果使得前面的幾管是清亮的，后面就 帶有棕色的，不知有沒有影響？估計有什么影響？前面的成分好還是棕色的成分好啊？

答：肯定有。還是重新混合重新分裝，我覺得有效成分會集中在棕顏色部分。

問：(2)為什么會出現棕色呢？

答：血清中的棕色多一些可能是因為紅蛋白的含量高些的緣故吧。

問：(3)血清滅活之后可以存放嗎？我的是前天滅活的，但是沒有加到培養基里，而是放在冰箱里，那下次 可以直接用嗎？還是再次滅活啊？

答：當然可以，如果多的話，分裝后放在－20℃，下次用時再解凍，也不用再滅活。用一管拿一 管，少許血清可以放在4℃。分裝時還要注意不要裝得太滿，以免溢出污染。

GIBCO 10091-148（新西蘭）胎牛血清出現顏色或沉淀的問題關于心肌細胞元代培養的FBS問題：

 (1)1%的血清完全培養基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細胞元代培養就不行。 10%的FBS完全 培養基效果都不太好，開始心肌細胞元代培養需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現另一個問題，在FBS完全培 養基中，成纖維細胞呈細胞，須得在培養基加入適量的BrdU以抑制其生長，純化心肌細胞。

 (2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 。

 (3)元代心肌細胞培養的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的 DMEM/F-12培養基培養。

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