植物elisa試劑盒檢測樣本的處理方法

  植物elisa試劑盒檢測應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中植物淀粉分支酶SBE水平。用純化的植物淀粉分支酶SBE抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物淀粉分支酶SBE，再與HRP 標記的植物淀粉分支酶SBE抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物淀粉分支酶SBE呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中植物淀粉分支酶SBE濃度。

  植物elisa試劑盒檢測的操作步驟：

  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃;

  2、設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  3、樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加;

  4、除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min;

  5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次;

  6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min;

  7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

  植物elisa試劑盒檢測的樣本處理：

  1、血清：使用不含熱原和內(nèi)dusu的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

  2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

  3、細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

  5、保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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