大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞RAOEC培養(yǎng)說(shuō)明書

  一、細(xì)胞培養(yǎng)條件

  細(xì)胞名稱大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞RAOEC

  生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)凍存條件無(wú)血清凍存液

  培養(yǎng)體系DMEM+10%FBS+1%雙抗

  傳代方法次建議1:2傳代 傳代情況2天換液

  備注用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過(guò)渡對(duì)比培養(yǎng)

  如果對(duì)比培養(yǎng)效果不好，建議直接購(gòu)買我們的完全培養(yǎng)基

  二、細(xì)胞收到后處理

  培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無(wú)菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(好40x,100x,200x各一張)，前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)，換液后將蓋子擰松)。

  三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

  a、細(xì)胞傳代：如果未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下：

  1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

  2. 添加1-2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA)至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上完全培養(yǎng)基終止消化。

  3.輕輕吹打細(xì)胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL完全培養(yǎng)基重懸。

  4. 將細(xì)胞懸液按1：2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25瓶)，補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，后放入到37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

  b、細(xì)胞凍存：

  1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次;

  2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min;

  3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無(wú)血清凍存液(貨號(hào)：C7001)，混勻后加入凍存管中。

  4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時(shí)以上再轉(zhuǎn)入液氮罐中。

  C、細(xì)胞復(fù)蘇：

  1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具)，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

  2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min;

  3、棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

  4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

  四、注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞貼壁不牢，在運(yùn)輸過(guò)程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。可按此方法：將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過(guò)渡培養(yǎng)(后期對(duì)比培養(yǎng))，沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25)，補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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  五、售后條款：

  1)細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?

  1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā);

  2. 細(xì)胞污染問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā);

  3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片)，重發(fā);

  4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā);

  5. 細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā);

  6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。

  大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒