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如何選擇二抗

發(fā)布時間:2022-04-13瀏覽次數(shù):1035返回列表

什么是二抗?

二抗是指用于靶向結(jié)合一抗的抗體。在多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實驗中,二抗經(jīng)常和一抗結(jié)合使用以檢測目標(biāo)蛋白。很多二抗都帶有標(biāo)記物,例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過氧化物酶(HRP),從而使二抗的信號可以被檢測到。

實驗中也可以使用帶有標(biāo)記物的一抗,但是二抗有很多優(yōu)點。無論是使用哪種一抗進行檢測,使用二抗可便于換不同的標(biāo)記物。例如,同樣的一抗可以與HRP標(biāo)記二抗一起用于免疫印跡,也可以與另一種Alexa Fluor 488熒光標(biāo)記二抗一起用于免疫熒光實驗。

另外,二抗結(jié)合在抗原位置的標(biāo)記染料比直標(biāo)一抗要多,從而增強檢測信號。使用二抗可以避免對一抗進行復(fù)雜且昂貴的化學(xué)標(biāo)記(偶聯(lián)),而且偶聯(lián)反應(yīng)(具有氨基酸特異性)可能干擾一抗對抗原的識別。

選擇合適的二抗

要選擇出一種適用于您的應(yīng)用和研究的佳二抗,建議考慮以下因素:

  • 種屬來源和種屬反應(yīng)性
  • 特異性反應(yīng)
  • 純化方法
  • 交叉吸附
  • 多重檢測能力
  • 抗體類型和亞型
  • 完整抗體還是抗體片段
  • 標(biāo)記物
  • 生物素結(jié)合蛋白

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