細(xì)胞質(zhì)染色試劑FDA是綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞質(zhì)探針，具有494/521nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。FDA是一種非熒光疏水性熒光素衍生物，它可以通過(guò)細(xì)胞膜，因此細(xì)胞內(nèi)酯酶水解產(chǎn)生高熒光產(chǎn)物熒光素的二乙酸酯基團(tuán)。熒光素分子在具有完整膜的細(xì)胞中積累，因此綠色熒光可用作細(xì)胞活力的標(biāo)記。不具有完整細(xì)胞膜或活性代謝的細(xì)胞可能不會(huì)積聚...

細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒(FDA,綠色熒光)

產(chǎn)品編號(hào)：HR8596

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存條件：

-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。有效期6個(gè)月。

【注】：

● 染料短期2周內(nèi)可以2-8℃保存。染料長(zhǎng)期不用可以-20℃保存。避免反復(fù)凍融。

● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒(FDA,綠色熒光)產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)胞質(zhì)染色試劑FDA是綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞質(zhì)探針，具有494/521nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

FDA是一種非熒光疏水性熒光素衍生物，它可以通過(guò)細(xì)胞膜，因此細(xì)胞內(nèi)酯酶水解產(chǎn)生高熒光產(chǎn)物熒光素的二乙酸酯基團(tuán)。熒光素分子在具有完整膜的細(xì)胞中積累，因此綠色熒光可用作細(xì)胞活力的標(biāo)記。不具有完整細(xì)胞膜或活性代謝的細(xì)胞可能不會(huì)積聚熒光產(chǎn)物，因此不會(huì)顯示出綠色熒光。

FDA的熒光產(chǎn)物的細(xì)胞內(nèi)保留特性較差，一般2小時(shí)保留率低于20%，需要保留特性較好的細(xì)胞質(zhì)染料的可以選擇貝博其它貨號(hào)的產(chǎn)品，例如Calcein AM染料（相關(guān)產(chǎn)品HR8629）。

檢測(cè)方法：

● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類(lèi)型：

● 懸浮細(xì)胞  ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● PBS緩沖液(pH7.4) ● HBSS（無(wú)酚紅）

使用注意事項(xiàng)：

● 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● 染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類(lèi)而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳條件。

● 以下方法僅供參考，根據(jù)需要使用，或者參考文獻(xiàn)的使用方法。

● 染色后立即進(jìn)行分析。

● 本染色液可用于細(xì)胞涂片、細(xì)胞的檢測(cè)。

細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒(FDA,綠色熒光)使用方法：

1、染色工作液的配制：

根據(jù)樣本數(shù)量，用HBSS或相應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)基或其他緩沖液將探針FDA進(jìn)行500-5000倍稀釋?zhuān)渲瞥扇旧ぷ饕骸?

【注】：

● 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，使用HBSS緩沖液或無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋染料儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。工作濃度應(yīng)根據(jù)不同細(xì)胞的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過(guò)10倍范圍的濃度下進(jìn)行測(cè)試。一般染色終濃度500-5000倍稀釋?zhuān)?000-2000倍適合大多數(shù)細(xì)胞樣本。

● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對(duì)母液進(jìn)行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。

● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

● 若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，熒光信號(hào)會(huì)衰減。

2、細(xì)胞染色

懸浮細(xì)胞染色

1) 用PBS洗滌細(xì)胞2次。

【注】：

● 500×g離心5分鐘。

2) 加入適量體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度大約為1×10⁶/mL。

3) 在37℃孵育細(xì)胞15～30分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

4) 孵育結(jié)束，500×g離心5分鐘。

5) 移除上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

6) 重復(fù)（4），（5）步驟兩次。

貼壁細(xì)胞染色

1) 用PBS洗滌細(xì)胞2次。

2) 細(xì)胞培養(yǎng)板中或細(xì)胞爬片上加入適量體積的染色工作液。

【注】：

● 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入100μL染色液即可。

3) 37℃孵育細(xì)胞15～30分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

4) 吸干染色工作液，用培養(yǎng)液洗培養(yǎng)板或蓋玻片2～3次，每次用預(yù)熱的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，然后吸干培養(yǎng)基。

3、用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)

激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為521nm。